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蛋白电泳

蛋白电泳

我们通常把“蛋白电泳”俗称为跑胶，如果按照这个字面意思来理解的话就是把蛋白质放在胶上跑，为啥要让蛋白质在胶上跑呢？上一讲我们说过，我们提到的蛋白是总蛋白，也就是说细胞里所有（理论上）蛋白都在里头了，但是我们要检测的只是其中的一两种，所以我们得想办法把各种蛋白质分离开，借助的方法就是跑胶。关于跑胶的原理，在第六讲说PCR的时候本侠已经跟大家解释过了，所以这里就不赘述了。与核酸电泳一样，蛋白质电泳也需要marker和loading buffer。与核酸电泳不一样的是，蛋白电泳（做WB时）的marker本身就是带有颜色的，在电泳过程中，我们可以清楚地看到marker上的每一个条带的位置，而核酸电泳的过程中我们是看不到marker的每一条带的，只有把胶经过核酸染料染色后，并且在紫外光下我们才能看到marker的条带。

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DNA电泳技术原理

DNA电泳技术原理

根据DNA分子量不同，采用外加电场使其分开，用EB嵌入DNA分子后在紫外下显色。

琼脂糖凝胶电泳是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。

1） 在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下，带负电的核酸分子向正极迁移。由于糖一磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。

2） 在一定的电场强度下，广西Western blot，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量和不同构型的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。

3） 溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动，这样溴化乙锭分子就会嵌入DNA分子中形成络合物，Western blot生产厂家，使DNA在紫外光下发射很强的荧光。在溴化乙锭足够的情况下，荧光的强度正比于DNA的含量，这样就可以检测DNA的浓度。

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核酸电泳凝胶的染色

凝胶的染色和观察 凝胶中核酸带的染色，常用溴化乙锭法和银染法。前者与琼脂糖凝胶的染色方法相同。

银染法的灵敏度较高，可如下操作:

(1) 将凝胶置固定液(10%乙醇，Western blot价格，0.5%冰醋酸)中固定10分钟;

(2) 双蒸水洗1-2次;

(3) 置0.01mol/L AgNO3溶液中，室温反应15-30分钟;

(4) 充分水洗;

(5) 置NaOH-甲醛混合液(200ml 3%NaOH，含1ml甲醛)中反应至条带显色清晰，本底适宜;

(6) 用5%冰醋酸终止反应。

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