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核酸电泳技术介绍

核酸电泳技术介绍

凝胶电泳分离核酸的基本原理凝胶电泳是分子生物学中鉴定、量化和纯化核酸的常用实验技术。 因其速度、简便性和通用性，该方法广泛应用于核酸的分离和分析。 采用凝胶电泳法，可在几分钟到数小时内分离出约0.1 - 25 kbp范围内的核酸，小型蛋白电泳槽厂商，且可高纯、高效地从凝胶中回收分离的核酸。

该项技术主要，在大小、电荷和结构的基础上，将电场施加于带电分子混合物上并引起迁移。 中性至碱性pH值(图1A)范围内，核酸中核苷酸骨架上的磷酸基团带负电。 因此，每个核苷酸携带一个净负电荷，小型蛋白电泳槽生产厂家，即，一个核酸分子的总电荷与核苷酸的总数或它的质量成正比。 换言之，DNA或RNA分子的荷质比是恒定的。 因此，小型蛋白电泳槽批发，它们在凝胶电泳中的迁移率主要取决于其大小（结构可比较时）（详细了解 核酸结构如何影响迁移）。 因此，当受到电场作用时，核酸从负极（阴极）向正极（阳极）迁移，较短的碎片比较长的碎片移动得更快，导致基于尺寸的分离。

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核酸电泳凝胶的染色

核酸电泳凝胶的染色

凝胶的染色和观察 凝胶中核酸带的染色，常用溴化乙锭法和银染法。前者与琼脂糖凝胶的染色方法相同。

银染法的灵敏度较高，可如下操作:

(1) 将凝胶置固定液(10%乙醇，0.5%冰醋酸)中固定10分钟;

(2) 双蒸水洗1-2次;

(3) 置0.01mol/L AgNO3溶液中，小型蛋白电泳槽，室温反应15-30分钟;

(4) 充分水洗;

(5) 置NaOH-甲醛混合液(200ml 3%NaOH，含1ml甲醛)中反应至条带显色清晰，本底适宜;

(6) 用5%冰醋酸终止反应。

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转印电泳的分类及注意事项：

         Western Blotting（蛋白质单项电泳后印迹转移）

         Eastern Blotting（蛋白质双向电泳后印迹转移）

         Southern Blotting（DNA印迹）          Northern Blotting（RNA印迹）

在转印过程中要控制温度 ，在低温或者冷循环条件下进行

对于分子量大于100KD的蛋白质大分子不用半干转

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