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核酸电泳凝胶的染色

核酸电泳凝胶的染色

凝胶的染色和观察 凝胶中核酸带的染色，常用溴化乙锭法和银染法。前者与琼脂糖凝胶的染色方法相同。

银染法的灵敏度较高，电泳槽，可如下操作:

(1) 将凝胶置固定液(10%乙醇，0.5%冰醋酸)中固定10分钟;

(2) 双蒸水洗1-2次;

(3) 置0.01mol/L AgNO3溶液中，室温反应15-30分钟;

(4) 充分水洗;

(5) 置NaOH-甲醛混合液(200ml 3%NaOH，含1ml甲醛)中反应至条带显色清晰，本底适宜;

(6) 用5%冰醋酸终止反应。

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转印电泳

                               转印电泳AG与LG反应的特点：特异性、比例性、可逆性

                             1，特异性：由抗原决定簇和LG分子的超变区之间空间结构的互补性确定的。

2，比例性：抗原与LG发生反应需遵循一定的量比关系。

                                                3，可逆性：抗原LG结合形成复合物后，在一定条件下又可解离恢复为抗原与LG的特性。

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影响电泳实验泳动速度的重要因素——支持物

    电泳实验多在固体支持物上进行，使样品中的不同组分形成不同的区带，称区带电泳。电泳结束后，支持物可以方便地进行染色等后续处理。

   对支持物的一般要求是均匀，吸附力和电渗小，机械性能好，便于染色或紫外光下检测。常用支持物有SDS——PAGE凝胶，琼脂糖凝胶、滤纸，醋酸纤维素薄膜等 ，   支持物性质不同也会影响泳动速率，如琼脂糖和聚酰胺凝胶都有大小不同的筛孔，在筛孔大的凝胶中溶质颗粒的泳动速率快，反之则慢。

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