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蛋白电泳

蛋白电泳

我们通常把“蛋白电泳”俗称为跑胶，如果按照这个字面意思来理解的话就是把蛋白质放在胶上跑，为啥要让蛋白质在胶上跑呢？上一讲我们说过，我们提到的蛋白是总蛋白，也就是说细胞里所有（理论上）蛋白都在里头了，但是我们要检测的只是其中的一两种，所以我们得想办法把各种蛋白质分离开，借助的方法就是跑胶。关于跑胶的原理，在第六讲说PCR的时候本侠已经跟大家解释过了，所以这里就不赘述了。与核酸电泳一样，蛋白质电泳也需要marker和loading buffer。与核酸电泳不一样的是，蛋白电泳（做WB时）的marker本身就是带有颜色的，在电泳过程中，我们可以清楚地看到marker上的每一个条带的位置，而核酸电泳的过程中我们是看不到marker的每一条带的，只有把胶经过核酸染料染色后，并且在紫外光下我们才能看到marker的条带。

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蛋白电泳

蛋白电泳中蛋白样品的分子结构

蛋白质分子结构可以分为4级：

一级结构：组成蛋白质多肽链的线性氨基酸序列。

二级结构：依靠不同氨基酸之间的C=O和N-H基团间的

氢键形成的稳定结构，主要为α螺旋和β

-折叠，β-转角，水平核酸电泳槽多少钱，无规卷曲

三级结构：通过多个二级结构元素在三维空间的排列

所形成的一个蛋白质分子的三维结构。

四级结构：用于描述由不同多肽链（亚基）间相互作

用形成具有功能的蛋白质复合物分子。

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               核酸电泳凝胶的制备和电泳步骤

操作方法如下:

(1) 根据所需要的凝胶的大小将相应的凝胶托盘按正确位置放置在制胶器内;

(2) 称取适量琼脂糖，置电泳缓冲液中，水平核酸电泳槽，加热使琼脂糖溶解;

(3) 待溶液冷至60℃，加入10mg/ml EB贮存液，使终浓度达0.5mg/ml;

(4) 在距离胶模底板0.5-1mm处放置电泳梳，将琼脂糖溶液倒入胶模中，厚度约3-5mm，注意避免产生气泡;

(5) 凝胶完全凝固后，移去梳子和透明胶，将凝胶放入电泳槽。加入TBE缓冲液使恰好没过胶面约1mm;

(6) 将DNA样品与1/6体积加样缓冲液混合后，加入样品槽中;

(7) 接通电源，使样品槽在负极端，用1-5v/cm的电压，电泳适当时间;

(8) 电泳结束后，可将含EB的凝胶直接放在紫外线检测仪上观察，并拍照记录，也可将不含EB的凝胶在0.5μg/ml的EB溶液中染色30-45分钟，再如上观察和拍照，记录结果。

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