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电泳实验技术原理

电泳实验的技术原理

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电泳是带电颗粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下，每一种分子都具有特定的电荷（种类和数量）、大小和形状，在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同，各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。60℃)，会使得水分过分蒸发，改变凝胶离子浓度，影响电泳效果。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和鉴定的基本原理。

带电颗粒在电场中泳动的速度称迁移率或泳动度。

 电泳时，带电颗粒（球形）在介质中受力平衡匀速运动，则有：

v =  F阻/f  = FE/f  = E·q/f  =  E·q/(6π·r·η)

       v — 泳动度               F阻 — 颗粒所受阻力

       E — 电场强度             q — 颗粒所带电荷

       r — 颗粒半径             η — 介质黏度

       FE — 颗粒所受电场力      f — 摩擦系数

由上式可见：泳动度与球形分子半径、介质粘度、颗粒所带电荷以及电场强度有关。  非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到更大的阻力，即粒子的泳动度与粒子形状有关。

蛋白电泳槽的凝胶置入与电泳

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a，将控制夹板呈打开方式放置于干净平整桌面上

b，将首块凝胶三明治以薄玻璃板向内方式放置于凝胶支撑架上，凝胶支撑架模铸于组件底部且每侧均有两个，此时凝胶板相对中心有30 度夹角，放置首块胶时须小心确认控制夹板保持平衡状态不会翻倒，在另一侧凝胶支撑架上放置第二块胶，共有两块胶相对中心倾斜（注：凝胶板必须以薄玻璃板向内方式放置于控制夹板两侧，同时，控制夹板需要 2 块胶板组合形成功能组件，如果运行1 或 3 块胶时，须使用单胶堵板代替另一侧的凝胶）。电泳中使用无反应活性的稳定的支持介质，电泳迁移率（或迁移速度）与分子大小、介质粘度等成反比。

c，用一只手轻轻将2块胶板推向中心靠紧绿色胶条，确保短玻璃板处在绿色胶条上部的凸起之下并压紧胶板，另一只手将控制夹板合拢在胶板上，使其锁定到位。

d，电泳槽下槽具有两个位置可放置两个电泳槽内芯：带插头电泳槽内芯在后，蘑菇头电泳槽内芯在前，如果只运行 2 块胶则只需用带插头电泳槽内芯，将其放在后部位置上使得红色正极与槽右侧的红色标记相对应，如需做 4 块胶，除放入带插头电泳槽内芯外，还要将蘑菇头电泳槽内芯放入前部位置，确认两者的红色正极与槽右侧的红色标记相对应（注意：位置和方向的错误会使上盖无法盖合）。电泳技术与病毒北京龙方科技为您提供信息如下，希望能对您有所帮助。

e，将上盖盖在电泳槽下槽上，确认插头位置正确（上盖上的障碍物可以防止定位错误）。

f，将电泳槽导线的双插头认准正负极插入电泳电源插孔内，恒压 200V 是 SDS-PAGE 和多数 native PAGE 电泳的推荐条件。在 200V 电压条件下运行，SDS-PAGE 大约需要 35 分钟。

g，电泳完成后关断电源，拔出电源插头，移开上盖，小心取出电泳槽内芯，倒出缓冲液。为防止缓冲液漏洒，请在打开控制夹板前倒掉缓冲液。

蛋白电泳

1、安装本电泳槽可以同时完成两块电泳凝胶的制胶和跑胶任务。制胶前请先将玻璃板洗净晾干，选取一块短玻璃板，用其顶部抵住电泳槽主体密封硅胶条偏上部位的凸起处，将其底部顺着电泳槽主体下部L型支撑架由外向内推至垂直角度，再将粘条玻璃板的顶部按正确方向（粘条侧向内，喇叭口处向上）卡入密封硅胶条上部的凹型槽内，再将玻璃板的底部顺着电泳槽主体下部L型支撑架由外向内推至垂直角度即可，电泳槽主体另外一侧的玻璃板安装方式同上。LF—CZ05A/B/C型高通量垂直电泳槽北京龙方科技为您提供信息如下，希望能对您有所帮助。两侧玻璃板放好后用一只手由上至下抓紧两侧的玻璃板，另一只手将电泳槽左右两侧的凹形夹板向玻璃板方向用力推入，完成玻璃板的固定。把制胶底座横向水平摆放，双手拖着电泳槽主体电极两侧的支撑平板，让电泳槽的主体外侧对准制胶底座内长方体胶条的中部区域，稍用力下压，听到两次“咔咔”声响后（制胶底座两侧的卡扣会锁紧在电泳槽主体底部的固定

位置）就说明安装已经完成，您可以放心灌胶了。

2、制胶

向两块玻璃板中间的凝胶腔内缓慢注入配制好的聚丙烯酰胺凝胶(如灌制梯度凝胶需使用梯度混合器)，先灌注分离胶,待分离胶凝固后,再灌浓缩胶，浓缩胶灌满后(高度至短玻璃板上沿处)，插入加样梳。待30至45分钟凝胶完全聚合后，制胶完成。在溴化乙锭足够的情况下，荧光的强度正比于DNA的含量，这样就可以检测DNA的浓度。轻轻拔出样品梳，注意不要损坏胶面，左手提起电泳槽主体（拇指和其他手指分别控制住两侧的玻璃板），右手用拇指和中指分别去抓住制胶底座两侧的卡扣，同时向内侧用力一压，制胶底座就会脱离电泳槽主体，两者脱离后将电泳槽主体按正负极的正确位置放入电泳槽的下槽内，向电泳槽主体的内腔中注入缓冲液,让内腔中的缓冲液液面没过短玻璃板,腔外缓冲液液面高度应在玻璃板底部往上2cm以上的高度。