DNA电泳原理
DNA电泳原理
生物大分子在一定pH条件下,通常带电荷,将其置于电场中,会以一定的速度向与其电荷性质相反的电极迁移,迁移速度称电泳速率。
电泳速率与电场强度、分子所带的净电荷数成正比,与分子与介质的摩擦系数成反比。 摩擦系数与分子的大小、构型及介质的粘度有关。
在生理条件下,DNA分子糖-磷酸骨架中的磷酸基团呈离子化状态,故DNA实际上呈多聚阴离子状态,在电场中向 正极方向迁移。
糖-磷酸骨架在结构上重复,故等量的双链DNA几乎带等量的净电荷。
如电场强度一定、电泳介质相同,电泳速率就取决于核酸分子的大小和构型。 构型相似的分子:分子量越大、迁移越慢。
LF—CZ05A/B/C型 高通量垂直电泳槽
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产品特点:
正负电极的铂金丝直径均为0.26mm,纯度为99.95%,
结实耐用,电场稳定。
双板一次可跑204个电泳样品,大大提升了实验效率。
凝胶玻璃板与边长一体化设计,让操作更简单。
可同时运行2块300×105mm的电泳凝胶。
技术参数:
电泳槽正负电极的铂金丝直径均为0.26mm,
纯度为99.95%。
凝胶面积:300×105mm。
凝胶标准厚度:1mm。
样品梳标准齿数:102齿(可以选配64齿)。
样品梳标准厚度:1mm。
蛋白电泳制胶
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制胶
将玻璃板洗净晾干,将厚板粘有边条的一侧与薄板重叠(薄板向外),放入制胶框内(如果放置困难可选择先放厚板再放薄板要求2块玻璃板底面对齐),将制胶夹胶框的卡锁转向外侧,将玻璃板固定。
用手捏紧制胶架上的固定夹,将整个制胶框置于制胶架上,松开固定夹,令卡块压住厚玻璃板,使玻璃板底面贴紧制胶架底部的密封垫。
向凝胶腔内缓慢注入配制好的聚丙烯酰胺凝胶(如灌制梯度凝胶需使用梯度混合器),先灌注分离胶,待分离胶凝固后,再灌浓缩胶。 浓缩胶灌满后,插入样品梳,待30至45分钟凝胶完全聚合后,制胶完成。
蛋白电泳槽的凝胶置入与电泳
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a,将控制夹板呈打开方式放置于干净平整桌面上
b,将首块凝胶三明治以薄玻璃板向内方式放置于凝胶支撑架上,凝胶支撑架模铸于组件底部且每侧均有两个,此时凝胶板相对中心有30 度夹角,放置首块胶时须小心确认控制夹板保持平衡状态不会翻倒,在另一侧凝胶支撑架上放置第二块胶,共有两块胶相对中心倾斜(注:凝胶板必须以薄玻璃板向内方式放置于控制夹板两侧,同时,控制夹板需要 2 块胶板组合形成功能组件,如果运行1 或 3 块胶时,须使用单胶堵板代替另一侧的凝胶)。槽内转印模块可与LF-Mini2型小型垂直电泳槽的上盖与下槽配套使用。
c,用一只手轻轻将2块胶板推向中心靠紧绿色胶条,确保短玻璃板处在绿色胶条上部的凸起之下并压紧胶板,另一只手将控制夹板合拢在胶板上,使其锁定到位。
d,电泳槽下槽具有两个位置可放置两个电泳槽内芯:带插头电泳槽内芯在后,蘑菇头电泳槽内芯在前,如果只运行 2 块胶则只需用带插头电泳槽内芯,将其放在后部位置上使得红色正极与槽右侧的红色标记相对应,如需做 4 块胶,除放入带插头电泳槽内芯外,还要将蘑菇头电泳槽内芯放入前部位置,确认两者的红色正极与槽右侧的红色标记相对应(注意:位置和方向的错误会使上盖无法盖合)。3),4℃放置1~2h,用净水洗5~8h(反复换水),带型肉眼可见,较低检测量为250ng。
e,将上盖盖在电泳槽下槽上,确认插头位置正确(上盖上的障碍物可以防止定位错误)。
f,将电泳槽导线的双插头认准正负极插入电泳电源插孔内,恒压 200V 是 SDS-PAGE 和多数 native PAGE 电泳的推荐条件。在 200V 电压条件下运行,SDS-PAGE 大约需要 35 分钟。
g,电泳完成后关断电源,拔出电源插头,移开上盖,小心取出电泳槽内芯,倒出缓冲液。为防止缓冲液漏洒,请在打开控制夹板前倒掉缓冲液。
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